摘要：目的建立盐酸羟考酮及其制剂中主要杂质氮氧化物的鉴别溶液，解决国内缺少该杂质对照品的问题。方法将盐酸羟考酮溶解，双氧水加热破坏的方法得到氮氧化物的鉴别溶液。结果与结论经HPLC、UV和LC—MS/MS验证，该鉴别溶液中的羟考酮氮氧化物与对照品结构一致，为同一物质，可用于盐酸羟考酮及其制剂中主要杂质羟考酮氮氧化物的定位鉴别。
关键词：盐酸羟考酮;羟考酮氮氧化物;定位鉴别;对照品
盐酸羟考酮是一种半合成的蒂巴因衍生物，它主要作用于中枢神经系统和平滑肌，为阿片受体激动剂，主要用于治疗各种原因引起的中、重度急慢性疼痛，具有生物利用度高、起效快、镇痛作用好、不良反应小等特点_1]。目前已有报道显示应用羟考酮替换大剂量盐酸吗啡止痛是一种减轻阿片类药物耐药的新途径口]。
盐酸羟考酮及其制剂以进口药品居多，主要来自美国马林克罗制药有限公司和英国BARDPHARMACEUTICALSLIMITED公司;而国内仅有北京华素制药股份有限公司生产。
羟考酮氮氧化物为盐酸羟考酮的主要降解杂质，结构式见图1。
目前部分盐酸羟考酮及其制剂的进口注册标准中对羟考酮氮氧化物进行了限度检查;而国内由于缺少该杂质的对照品，并未对其进行限度检查。本文拟采用将盐酸羟考酮用溶剂溶解，双氧水加热破坏的方法得到氮氧化物的鉴别溶液，使盐酸羟考酮降解为氮氧化物，制成羟考酮氮氧化物的定位鉴别溶液，以满足盐酸羟考酮及其制剂中羟考酮氮氧化物限度检查的需要，解决国内缺少该杂质对照品的问题。
1仪器及试药
Agilent1100高效液相色谱仪，ThermoLTQ—OrbitrapXL质谱仪。
羟考酮氮氧化物对照品(NappPharmaceuticalsLimited，批号：STND1116)，盐酸羟考酮对照品(NappPharmaceuticalsLimited，批号：STAB864)，盐酸羟考酮胶囊(英国BardPharmaceuticalsLtd.，批号：139439、139992、140242、139440、139995、140497、139443、139445、140243)。甲醇和乙腈为色谱纯，双氧水浓度为3O，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
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2方法与结果
2.1色谱条件
采用AgilentEcilpseplusC8(4.6mill×1501Tim，5)色谱柱;流动相：0.01mol·I辛烷磺酸钠溶液(含0.2三乙胺，0.5磷酸，用3o氢氧化钠溶液调节pH至2.5)一乙腈(820：180);进样体积：5L;柱温：50℃;检测波长：206nm;流速：1.0mL·min。laJ0
2.2HPLC—MS条件
HPLC条件：10mmol·L乙酸铵(乙酸调节pH至2.5)一甲醇(6：4)为流动相;流速0.2mL·min。质谱条件：离子源温度275℃;离子源电压5000V;离子源气流速20L·min～;电离模式：ESI(+)，喷雾电压4800V;气帘气流速5L·min～;质量分析器：FTOrbitrap，质量范围(m/z)1O0～1300;多级质谱：MS一MS。
2.3对照品溶液的制备
分别精密称取羟考酮氮氧化物和盐酸羟考酮对照品适量，加水溶解并分别稀释制成每1mL中含2mg的溶液，作为羟考酮氮氧化物对照品溶液和盐酸羟考酮对照品溶液。
2.4鉴别溶液的制备
将10mg盐酸羟考酮溶解在5mI水中，加入l滴氨水，加入0.1mL双氧水破坏，置70℃水浴中加热2h，冷却至室温，得到羟考酮氮氧化物的鉴别溶液[4]。
2.5验证
2.5.1DAD紫外图谱验证
取该鉴别溶液与对照品溶液进行HPLC—DAD紫外图谱比较，二者中羟考酮氮氧化物色谱峰的紫外图谱一致，结果见图2。
2.5.2保留时间验证
分别采用“2.1”项下、0.01十二烷基磺酸钠水溶液一三乙胺一甲醇(45：0.3：55，用磷酸调节pH为4.3)和0.05mol·L磷酸氢二钾(含0.12三乙胺，用磷酸调节pH为3.04-0.1)一甲醇一t一丁基甲醚(800：200：5)3个不同的色谱条件，结果在3个流动相体系中，该鉴别溶液与对照品溶液中的羟考酮氮氧化物的保留时间均一致。
2.5.3LC-MS验证
羟考酮氮氧化物在“2.2”项条件下，其母离子碎片高分辨结果分别见图3和表1。
对羟考酮氮氧化物鉴别溶液中主峰的母离子进行多级质谱分析及裂解途径分析，结果分别见表2和图4。
以上结果表明该鉴别溶液破坏得到的羟考酮氮氧化物的结构与对照品一致。
2.6样品测定
按“2.1”项下条件，测定盐酸羟考酮胶囊中羟考酮氮氧化物杂质的百分含量，结果见表3。
3讨论
3.1破坏条件选择
实验中试用了不同体积的双氧水(O.1、0.2、0.3mL)、不同的加热时间(1、2、3h)和温度(60、70、80~C)，最终采用正交实验的方法确定破坏条件：盐酸羟考酮溶于适量水中，加入1滴氨水，再加入0.1H双氧水破坏，置7O℃水浴中加热2h破坏即得。
3.2计算方法
羟考酮氮氧化物相对于羟考酮的响应因子为0.8，故有关物质测定中羟考酮氮氧化物采用鉴别溶液定位后，再采用加校正因子的主成分自身对照法计算其百分含量。
4结语
该方法简便、准确，可用于盐酸羟考酮及其制剂中主要杂质羟考酮氮氧化物的定位鉴别，有效地解决了国内目前缺少羟考酮氮氧化物对照品的问题。另外，由于阿片类药物均具有类似的叔氮结构，均易氧化生成相应的氮氧化物杂质;因此采用双氧水加热破坏的方法得到氮氧化物杂质鉴别溶液的方法，不失为解决目前国内阿片类药物缺少氮氧化物杂质对照品和有效提高该类药物质量标准的方法之一。
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