【摘要】 目的 观察四妙勇安汤不同提取部位的抗炎作用。方法 利用二甲苯致小鼠耳廓肿和大鼠琼脂性肉芽肿炎症模型，观察不同提取部位对炎症的影响。结果 大孔树脂50%醇洗液部位对小鼠耳廓肿胀度有明显的抑制作用 (P<0.05);对大鼠琼脂性肉芽肿也有明显的抑制作用(P<0.05，P<0.01)，且呈一定的量效关系。结论 四妙勇安汤大孔树脂50%醇洗液部位具有显著的抗炎作用。
【关键词】 四妙勇安汤,提取部位,抗炎
四妙勇安汤为治疗热毒型脱疽的著名古方，由金银花、玄参、当归、甘草组成，该方能滋阴降火、和营解毒，为治疗血栓闭塞性脉管炎的有效验方。现代研究也证实本方水煎液具有较强的抗炎作用[1]，研究表明原方和氯仿萃取部位对小鼠耳廓肿胀度有明显的抑制作用[2]。本实验对四妙勇安汤不同提取部位(金银花挥发油、当归挥发油、醇沉部分、大孔树脂残留液、大孔树脂水洗液、大孔树脂50%醇洗液)的抗炎作用进行药效研究。
1 材 料
1.1 试药
阿斯匹林(100 mg/片，批号：XK153)Quimica Farmaceutica Bayer,S.A.生产;琼脂(购自中国药品生物制品检定所，批号为980424);四妙勇安汤各提取部位由江苏省中药质量控制工程技术研究中心提供，金银花挥发油和当归挥发油是二氧化碳超临界萃取物溶解所得。按照处方称取药材一定量，进行水提醇沉，滤过，滤液用SP825型树脂进行纯化，分别得到残留液、水洗液和50%醇洗脱液。
1.2 动物
清洁级KM种小鼠，♀♂各半，体质量25～30 g，合格证号：SCXK(沪)2002?0010;清洁级SD大鼠，雄性，体质量180～220 g，合格证号：SCXK(沪)2002?0010。动物购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(原中科院上海实验动物中心)。
1.3 仪器
PB303N型电子天平，上海梅特勒托利多公司。
2 方法与结果
2.1 抗炎有效部位的药效筛选
2.1.1 实验分组 取小鼠80只(禁食12 h)，称重，随机分为8组，每组10只(♀♂各半),分别为空白对照组、阿斯匹林(阳性药)组、金银花挥发油、当归挥发油、醇沉部分、大孔树脂残留液、大孔树脂水洗液、大孔树脂50%醇洗液组共8组。
2.1.2 实验方法[3]
各组按表1剂量分别灌胃给药(其中供试品各组剂量相当于临床等效剂量)，给药量均为35 mL/kg，阿斯匹林剂量为0.2 g/kg(用0.57%阿斯匹林灌胃35 mL/kg)，空白对照组小鼠用蒸馏水35 mL/kg灌胃给药。给药后1 h各鼠左耳正反两面涂二甲苯0.03 mL/只，右耳作对照，20 min后脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径6 mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，用天平分别称重，以左右耳片质量之差为肿胀度。计算各组肿胀度和肿胀率(%)，计算肿胀抑制率(%)。各给药组与空白对照组采用t检验进行统计学处理。
肿胀率=[左耳质量(mg)-右耳质量(mg)]/ 右耳质量(mg) ×100%
肿胀抑制率=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100%
2.1.3 实验结果 大孔树脂50%醇洗液与空白对照组肿胀率相比，差异有显著性，肿胀抑制率为22.2%，提示大孔树脂50%醇洗液部位为四妙勇安汤抗炎的有效部位。结果见表2。表1 四妙勇安汤各提取部位药液浓度及给药剂量表2 四妙勇安汤各提取部位对小鼠耳廓肿胀的影响
2.2 大孔树脂醇洗液对大鼠琼脂性肉芽肿的影响
2.2.1 动物建模 取雄性大鼠在背部中线处取2.0 cm×2.0 cm面积去毛，消毒，皮下注射2%琼脂(55 ℃水浴保温)2 mL，注射后立即凸起球状包块即可。
2.2.2 实验分组与给药[3] 取四妙勇安汤大孔树脂50%醇洗部位：批号：2005?1?2,浓度为10 g生药/mL，临用前用蒸馏水配成4.95、2.475、1.238 g生药/mL，分别作为大、中、小剂量用药。隔日取60只肉芽肿模型大鼠，随机分为5组，每组12只，分别为模型对照(蒸馏水)组、阳性药(阿斯匹林)组和四妙勇安汤大孔树脂50%醇洗部位大、中、小剂量组。大、中、小剂量组大鼠分别用含醇洗部位4.95、2.475、1.238 g生药/mL药液灌胃10 mL/kg(即剂量分别为49.5、24.75、12.38 g生药/kg)，阳性药(阿斯匹林)组用含1 g/mL药液灌胃10 mL/kg(即剂量为0.1 g/kg)，模型对照组用蒸馏水灌胃10 mL/kg。每日灌胃给药1次，连续给药10 d，每日观察肉芽肿变化，末次给药1 h后脱颈椎处死大鼠，剪开肉芽部位皮肤，剥离肉芽肿琼脂块并称重，记录湿重，根据肉芽肿的湿重计算肉芽肿抑制率(%)，按如下公式计算：
抑制率=(模型对照组湿重均值-给药组湿重均值)/模型对照组均值×100%
2.2.3 实验结果 以每100 g肉芽的重量即肉芽肿系数作为指标，阿斯匹林组和各剂量组与模型对照组进行组间t检验，具体数据见表3。由表可得出：四妙勇安汤50%醇洗部位的大剂量组与模型组相比差异有极显著性，中剂量差异有显著性，表明四妙勇安汤50%醇洗部位对大鼠琼脂性肉芽肿有明显的抑制作用，且呈一定的量效关系。表3 四妙勇安汤50%醇洗部位对大鼠琼脂性肉芽肿的抑制作用
3 讨 论
通过小鼠急性炎症试验(二甲苯致耳肿胀法)和大鼠慢性炎症试验(琼脂性肉芽肿法)对四妙勇安汤的抗炎有效物质基础进行了药效筛选，结果表明大孔树脂醇洗部位有明显的抗炎作用，且呈一定的量效关系。为四妙勇安汤古方的现代研究和进一步开发制剂打下基础。其中除了大孔树脂50%醇洗部位有显著的抗炎作用外，金银花挥发油、当归挥发油、醇沉部分、大孔树脂残留液对小鼠耳廓肿胀都一定的抑制作用，建议可在以后的研究中对以上提取部位合并做进一步的药理药效研究。
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