摘要：目的：采用高效液相色谱法测定不同产地及不同采收期凌霄花中麦角甾苷的含量，比较不同产地、不同采收期凌霄花的质量差异。方法：采用UltimateXB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温25℃，以乙腈-0.1%冰醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，检测波长334nm。结果：麦角甾苷浓度在25.75-206.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999。平均回收率为104.3%，(RSD=0.9%，n=6)。不同产地的凌霄花中，麦角甾苷以江苏连云港采收的含量最高，山东产的凌霄花中麦角甾苷含量在叶部的含量明显高于花部与茎部。结论：本方法操作简单、快速、重复性好，可用于测定凌霄花中麦角甾苷的含量。
关键词：凌霄花;麦角甾苷;HPLC
凌霄花FlosCampsis为紫葳科植物凌霄Camp⁃sisgrandiflora(Thunb.)K.Schum.的干燥花。本品多为栽培，主产于江苏、浙江、福建与广东等地，植物资源丰富。其味甘、酸，性寒，归肝、心包经，主治月经不调，血滞经闭，产后乳肿，血热风痒等病症[1]。在临床上多用于治疗脑血管疾病[2]、妇科疾病[3]以及炎症[4]等。现代药理实验证明凌霄花能够改善血液循环，改善血液流变学，舒张冠状动脉以及抑制血栓的形成[5，6]。此外，凌霄花还具有抗炎与抗氧化的作用，其有效成分主要是五环三萜类与苯乙醇苷类化合物麦角甾苷[7]。凌霄花在我国资源丰富，近几年国内外学者对其进行了化学成分与药理作用方面的研究，但关于其质量控制尚未见相关文献报道。《中国药典》(2015年版)一部对凌霄花质量凌霄花FlosCampsis为紫葳科植物凌霄Camp⁃sisgrandiflora(Thunb.)K.Schum.的干燥花。本品多为栽培，主产于江苏、浙江、福建与广东等地，植物资源丰富。其味甘、酸，性寒，归肝、心包经，主治月经不调，血滞经闭，产后乳肿，血热风痒等病症[1]。在临床上多用于治疗脑血管疾病[2]、妇科疾病[3]以及炎症[4]等。现代药理实验证明凌霄花能够改善血液循环，改善血液流变学，舒张冠状动脉以及抑制血栓的形成[5，6]。此外，凌霄花还具有抗炎与抗氧化的作用，其有效成分主要是五环三萜类与苯乙醇苷类化合物麦角甾苷[7]。凌霄花在我国资源丰富，近几年国内外学者对其进行了化学成分与药理作用方面的研究，但关于其质量控制尚未见相关文献报道。《中国药典》(2015年版)一部对凌霄花质量的检测只有一般的性状、显微鉴别、采用对照药材进行薄层色谱鉴别，以及水分、总灰分、酸不溶性灰分的检查，并未对凌霄花的含量测定做出规定[1]，这些质量评价方法难以控制凌霄花药材的真伪和优劣。因此，建立全面、系统地控制凌霄花质量的分析方法十分必要。本文采用HPLC法，测定了不同产地及不同采收期凌霄花中麦角甾苷的含量，以期为控制凌霄花的内在质量及进一步开发利用提供一定的科学依据。
1仪器与试药
1.1仪器
LC-20AB型高效液相色谱仪(日本岛津);El⁃masonicS150型超声波清洗仪(德国Elma);PL203型电子天平(瑞士METTLERTOLEDO);UltimateXB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。
1.2药品与试剂
乙腈、甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。对照品麦角甾苷购于美国Sigma公司，其纯度大于98%。凌霄花采自不同产地，不同采收期的凌霄花采收自福建卫生职业技术学院，经福建农林大学园艺学院陈清西教授鉴定为紫葳科植物凌霄(Campsisgrandiflora)的花，60℃烘干，粉碎后过五号筛，干燥保存，备用。
2方法
2.1色谱条件
色谱柱采用UltimateXB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。
流动相乙腈(A)-0.1%冰醋酸(B)梯度洗脱，0-25min，A10%-27%，25-30min，A27%。流速1.0mL·min-1，检测波长334nm，柱温25℃，进样量20μL。对照品和凌霄花样品(批号2017072001)色谱图见图1。
2.2对照品溶液的制备
精密称取麦角甾苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成浓度约为0.5mg·mL-1的对照品储备液。精密量取5mL，置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备
精密称取凌霄花粉末(过五号筛)0.4g，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声提取60min(100W，40kHz)，温度25℃。放冷，以甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得凌霄花供试品溶液。
2.4线性关系考察
分别精密量取对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20μL，按“2.1”项下色谱条件测定。以对照品浓度X(μg/mL)为横坐标，测得的峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，回归方程：Y=66767X-6402.9，r=0.9999。结果表明，麦角甾苷在25.75-206μg/mL范围内具有良好线性关系。
2.5精密度试验
取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定麦角甾苷的峰面积。结果峰面积RSD为0.5%。
2.6重复性试验
取同一批凌霄花的粉末(批号2017072001)6份，按“2.3”项下方法分别制备，按“2.1”项色谱条件，测定麦角甾苷的峰面积，计算麦角甾苷含量，结果样品中麦角甾苷的平均含量为1.25%(RSD=0.99%，n=6)。
2.7稳定性试验
取供试品溶液分别于制备后0、2、4、6、8、10、12、24h进样，记录麦角甾苷的峰面积，结果其峰面积RSD为0.3%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8回收率试验
精密称取已测定含量的样品(批号2017072001)共6份，分别精确加入一定量的麦角甾苷对照品，混匀后，按“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，计算平均回收率，结果见表1。
2.9样品的含量测定
分别取不同产地和不同部位的凌霄花各3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定，按外标法计算凌霄花中麦角甾苷的含量，结果见表2、表3。
3讨论
不同产地的凌霄花中，麦角甾苷以江苏连云港采收的含量最高，这为江苏产凌霄花质量最优提供了一定的科学依据。总体来说，广东和福建地区凌霄花中麦角甾苷的含量差别不大，华南地区相比华中与华北地区含量偏低。这可能与广东福建地区光照太过充足，温度与湿度均较高等生长环境有关。
凌霄花在中医临床的应用悠久而广泛，其花、根、茎和叶均可入药，并且所含化学成分基本相同，因其传统药用部位是花，所以长期以来，科研工作者的研究目光都聚焦于凌霄花，而其根、茎、叶往往弃之不用，但凌霄花受气候、种植以及采集等多种因素影响，其产量有限，故临床用量一直不大，这就限制了凌霄的大规模开发和应用。如果能对凌霄的其他不同部位加以研究利用，可明显扩大其药源。因此，本实验对采自山东高密与山东济南的凌霄花进行不同部位的含量分析，由结果可以看出，无论是山东高密还是山东济南，麦角甾苷含量在叶部的含量明显高于花部与茎部，凌霄花的开花期在6-10月，本实验只测定6月份的样品，尚未对比其他开花期月份的结果，不能确定是否在整个开花期叶中的麦角甾苷含量均远高于花部。下一步实验计划进行不同采收期凌霄花的叶、花中的麦角甾苷含量研究。
麦角甾苷作为凌霄花中主要的活性成分之一，它的含量高低对于凌霄花的内在质量具有重要的意义。本实验结果表明，产地、采收部位对麦角甾苷的含量均有较大的影响，本实验结果对于提高凌霄花药材利用率，为进一步开发利用凌霄花药材提供一定的研究依据。
HPLC法测定不同产地不同部位凌霄花中麦角甾苷的含量相关期刊推荐：《植物研究》创刊于1959年，为教育部主管、东北林业大学主办的植物学综合性学术期刊，是我国植物界创刊最早的期刊之一。主要刊登：系统演化植物学、植物生态学、植物化学、植物解剖学、植物分类学、植物遗传学、细胞工程学、植物生理和分子生物学等方面论文。
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